FITC、BODIPY、Cy5-依鲁替尼（Ibrutinib）的荧光探针技术

依鲁替尼（Ibrutinib）的荧光探针技术

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依鲁替尼作为BTK不可逆抑制剂，常用于设计FRET探针、NanoBRET探针或荧光蛋白偶联探索作用机制：

✦ 1. 荧光标记设计逻辑

NanoBRET探针：将依鲁替尼与NanoLuciferase可相鄰接近BTK，监测信号产生 。

FRET探针：依鲁替尼被接入荧光供体（如FITC、BODIPY）和受体（Cy5）实现荧光能量转移。在BTK结合位点触发FRET变化，用以测量亲和力 。

标记位置选择：依鲁替尼分子含硫醇靶向Cys481位点，改造空间位点（如苯氧基苯甲酸结构）可用于接入荧光标签而不影响活性 。

✦ 2. 合成与标记方式

引入短聚乙二醇（PEG）或烷基linker，在末端接NHS酯染料（如BODIPY-FL、Cy3、FITC）。

偶联化学：

✦ 3. 实验方法和注意

对比可用click化学，将Azide-依鲁替尼与Alkyne-荧光染料连接。

细胞内靶向验证：荧光探针与BTK共定位实验，结合Western blot、活体荧光显像。

体外结合实验：用FRET/NanoBRET结合BTK野生型vs突变体（如L528W）比较结合亲和力 。

用途：仅应用于科研，不能用于人体实验！

稳定性评估：热稳定分析、光漂白测试等。

图1｜依鲁替尼（Ibrutinib）的荧光探针技术

以上资料，仅用于科研

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