多种荧光标记酶的定制合成服务---Sur-Release公司

◆ 一、荧光标记酶简要介绍

荧光标记酶是通过共价偶联等技术将荧光基团与酶分子结合形成的功能复合物，兼具酶的生物催化活性与荧光基团的示踪特性，可实现酶在生物体系中的定位、动态追踪及活性定量分析，广泛应用于生命科学研究、药物筛选、临床检测等领域。其核心优势在于将 “酶的特异性功能” 与 “荧光的高灵敏度检测” 相结合，解决了传统酶学研究中 “不可视化” 的痛点。

◆ 二、荧光标记酶相关产品（展示部分）

FITC标记木瓜蛋白酶（FITC-Papain）

Cy3标记溶菌酶（Cy3-Lysozyme）

Cy5标记萤火虫荧光素酶（Cy5-Firefly Luciferase）

ICG标记辣根过氧化物酶（ICG-HRP）

FAM标记胰蛋白酶（FAM-Trypsin）

TAMRA标记乙酰胆碱酯酶（TAMRA-Acetylcholinesterase）

Cy5.5标记海肾荧光素酶（Cy5.5-Renilla Luciferase）

MCA标记脲酶（MCA-Urease）

FITC标记纳米荧光素酶（FITC-NanoLuc）

Cy3标记纤维素酶（Cy3-Cellulase）

FAM标记碱性磷酸酶（FAM-Alkaline Phosphatase）

ICG标记葡萄糖氧化酶（ICG-Glucose Oxidase）

TAMRA标记凝血酶（TAMRA-Thrombin）

Cy5标记 β- 半乳糖苷酶（Cy5-β-Galactosidase）

FITC标记胆碱酯酶（FITC-Cholinesterase）

Cy5.5标记过氧化氢酶（Cy5.5-Catalase）

MCA标记弹性蛋白酶（MCA-Elastase）

FAM标记天冬酰胺酶（FAM-Asparaginase）

Cy3标记脂肪酶（Cy3-Lipase）

ICG标记超氧化物歧化酶（ICG-SOD）

◆ 三、Sur-Release公司

✦ 案例1：FITC标记溶菌酶（FITC-Lysozyme） ｜ 案例2：Cy5标记的辅酶NADH｜ 案例3：Cy5标记荧光素酶（Cy5-FLuc）

✦ （1）定制需求荧光基团：FITC酶来源：蛋清溶菌酶（纯度≥98%）标记比例：1:2（FITC: 溶菌酶）应用场景：细菌结合位点追踪及抗菌活性检测 ｜ 某科研单位为开展线粒体代谢通路荧光成像研究，需定制Cy5标记的辅酶NADH（β- 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸），核心要求包括：荧光标记位点不影响辅酶生物活性、标记物在生理pH下稳定、荧光量子产率≥0.25。 ｜ （1）定制需求荧光基团：Cy5酶类型：萤火虫荧光素酶（FLuc）定制要求：保留ATP依赖性发光活性，用于活体肿瘤成像

✦ （2）技术参数与结果荧光特性：激发峰492nm，发射峰520nm酶活性：比活性≥20000 U/mg（标记前22000 U/mg，保留率91%）纯度鉴定：SDS-PAGE电泳单一条带，分子量约14.3kDa｜ 成品验证显示，Cy5 - 辅酶NADH的荧光激发波长646nm、发射波长662nm，量子产率0.28，满足客户要求；体外酶促反应实验证明，其与乳酸脱氢酶的结合活性保留率达92%，可有效参与代谢循环。 ｜ 该定制产物成功用于 “肿瘤靶向治疗药物筛选”，通过同时检测FLuc生物发光（酶活性）和Cy5荧光（定位），实现治疗效果的双重验证。

图1｜FITC标记溶菌酶

图2｜FITC - 溶菌酶

◆ 四、Sur-Release公司

◆ （一）定制服务核心方向

Sur-Release公司，涵盖荧光基团选型、酶分子筛选、标记工艺优化、产物纯化鉴定全流程，可根据客户需求实现 “荧光 - 酶” 组合定制、标记位点精准控制、活性保留率优化等个性化服务。

◆ （二）可选荧光种类及特性

✦ 荧光基团 ｜ 激发波长（nm） ｜ 发射波长（nm） ｜ 标记机制 ｜ 核心优势

✦ FITC（异硫氰酸荧光素） ｜490-495｜520-519｜ 与赖氨酸残基伯胺形成硫脲键 ｜ 黄绿色荧光、组织穿透力强、低背景

✦ Cy3｜550｜570｜NHS酯活化偶联氨基 / 巯基 ｜ 红光区荧光、光稳定性好

✦ Cy5｜650｜670｜NHS酯活化偶联氨基 / 巯基 ｜ 近红外发射、组织穿透深

✦ Cy5.5｜675｜694｜NHS酯活化偶联氨基 / 巯基 ｜ 抗光漂白、信噪比高

✦ ICG（吲哚菁绿） ｜780｜800｜ 与羧基 / 氨基共价偶联 ｜ 近红外光谱区、无自发荧光干扰

✦ FAM｜494｜518｜ 琥珀酰亚胺酯偶联氨基 ｜ 荧光量子产率高、pH稳定性好

✦ TAMRA｜547｜573｜ 琥珀酰亚胺酯偶联氨基 ｜ 发射波长红移、抗淬灭

✦ MCA（甲氧基香豆素乙酸） ｜360｜410｜ 琥珀酰亚胺酯偶联氨基 ｜ 紫外激发、荧光强度高

◆ （三）可选酶类型及应用领域

✦ 酶类别 ｜ 代表酶种 ｜ 来源 ｜ 核心功能

✦ 蛋白酶类 ｜ 木瓜蛋白酶（Papain） ｜ 番木瓜 ｜ 水解蛋白质肽键

✦ 溶菌（Lysozyme） ｜ 蛋清 ｜ 水解细菌肽聚糖、抗菌 ｜ 细菌 - 宿主相互作用、抗菌药物筛选

✦ 胰蛋白（Trypsin） ｜ 猪胰 ｜ 特异性水解精氨酸 / 赖氨酸羧基端肽键 ｜ 蛋白质组学分析、酶解实验

✦ 荧光素酶类 ｜ 萤火虫荧光素酶（FLuc） ｜ 北美萤火虫 ｜ATP依赖型生物发光

✦ 海肾荧光素（RLuc） ｜ 海肾 ｜ 无需ATP、腔肠素为底物 ｜ 缺氧环境检测、双荧光素酶报告系统

✦ 其他功能酶 ｜ 辣根过氧化物酶（HRP） ｜ 辣根 ｜ 催化过氧化物分解、显色反应

✦ 乙酰胆碱酯（ACE） ｜ 动物组织 ｜ 水解乙酰胆碱 ｜ 神经科学研究、农药残留检测

✦ 脲酶（Urease） ｜ 巨豆 ｜ 催化尿素分解为氨和二氧化碳 ｜ 环境监测、临床尿素检测

✦ 纤维素（Cellulase） ｜ 微生物 ｜ 水解纤维素 ｜ 工业酶工艺优化、生物质转化研究

◆ （四）荧光标记核心技术与工艺

标记反应机制

氨基偶联：荧光基团（如FITC、Cy系列）通过异硫氰酸酯或NHS酯活化，与酶分子表面赖氨酸残基的 ε- 氨基形成稳定共价键（硫脲键 / 酰胺键），反应条件温和（pH 7.0-9.0），避免酶活性中心破坏。

巯基偶联：针对含半胱氨酸的酶，荧光基团通过马来酰亚胺活化，与巯基（-SH）特异性偶联，标记位点更精准。

FRET配对标记：采用 “供体 - 受体” 荧光对（如FAM-TAMRA、MCA-DNP），标记于酶的底物结合区域，通过荧光淬灭 / 恢复实现酶活性实时监测。

关键工艺步骤

预处理：酶分子纯度纯化（纯度≥95%）、缓冲液置换（去除干扰基团）；

标记反应：精准控制荧光基团与酶的摩尔比（1:1至1:10）、反应温度（4-25℃）、反应时间（2-24h），确保标记效率与活性保留；

纯化鉴定：通过凝胶过滤层析 / 离子交换层析去除游离荧光基团，经SDS-PAGE验证纯度、荧光光谱检测标记效率、酶活性测定验证功能（活性保留率≥80%）；

稳定性优化：添加保护剂（如BSA、甘油），确保产物在 - 20℃下避光储存6个月以上稳定。

◆ （五）定制服务汇总表

✦ 定制维度 ｜ 服务内容 ｜ 客户可定制化选项

✦ 荧光选择 ｜ 单一荧光标记、双荧光标记（FRET配对） ｜ 荧光基团种类、激发 / 发射波长需求

✦ 酶选择 ｜ 常规酶定制、稀有酶定制、重组酶定制 ｜ 酶来源、纯度要求、活性单位需求

✦ 标记参数 ｜ 标记位点、标记比例、间隔臂引入 ｜ 标记摩尔比（1-10个荧光基团 / 酶分子）、间隔臂长度（如Ahx）

✦ 产物交付 ｜ 冻干粉 / 液体形式、规格定制 ｜ 交付量（100μg-10mg）、缓冲液类型

◆ 五、荧光标记酶相关参考文献

✦ 1、基于单荧光标记DNA底物的荧光生成型聚合酶、核酸内切酶和连接酶检测英文名：Fluorogenic polymerase, endonuclease, and ligase assays based on DNA substrates labeled with a single fluorophore链接：https://www.researchgate.net/publication/49819743Fluorogenic_polymerase_endonuclease_and_ligase_assays_based_on_DNA_substrates_labeled_with_a_single_fluorophore主要内容：开发了单荧光标记底物技术，用于核酸修饰酶（聚合酶、连接酶等）的活性检测，提出荧光标记酶的简化设计方案，降低制备成本并拓宽应用场景，为体外酶学检测提供新方法。2、双荧光素酶报告基因实验在基因转录调控研究中的应用英文名：Application of dual-luciferase reporter assay in the study of gene transcriptional regulation链接：https://www.genecreate.cn/industry_news/3389.html主要内容：系统阐述了萤火虫荧光素酶（FLuc）与海肾荧光素酶（RLuc）的双标记技术，验证了荧光标记酶在启动子活性分析、蛋白互作检测中的高灵敏度与定量准确性，对比了双荧光系统与传统方法的优势。3、6-羧基二乙酸荧光素标记酯酶在活细胞分选与增殖追踪中的应用英文名：Application of 6-CFDA labeled esterase in live cell sorting and proliferation tracking链接：http://m.toutiao.com/group/7564685110826549779/主要内容：报道了6-CFDA荧光标记酯酶的活细胞特异性标记技术，验证了其低毒性、高稳定性的特点，可实现活细胞分选、增殖代数分析及高通量药物毒性筛选，荧光信号维持时间达24-48小时。 ｜4、荧光素酶标记在活细胞动态追踪与肿瘤成像中的研究进展英文名：Research progress of luciferase labeling in live cell dynamic tracking and tumor imaging链接：https://www.163.com/dy/article/KH074VGU05568KW1.html主要内容：结合Cre-loxP重组酶系统，探讨了荧光素酶标记酶在细胞谱系示踪、肿瘤活体成像中的应用，重点分析了时间特异性标记技术的优势，为肿瘤发生发展机制研究提供工具支持。5、荧光共振能量转移（FRET）技术在蛋白酶活性实时监测中的应用英文名：Application of FRET technology in real-time monitoring of protease activity链接：http://m.toutiao.com/group/7554211843481354779/主要内容：利用FAM-TAMRA荧光对标记蛋白酶，构建了基于FRET的酶活性实时检测体系，实现了蛋白酶水解过程的动态追踪，为酶抑制剂筛选及酶动力学研究提供了高效工具。

图5｜单荧光标记DNA底物

◆ 六、Sur-Release公司

✦ 1. 精准标记与活性双保障

定点偶联+低温柔性反应，避开酶活性中心，酶活性保留率≥80%（超行业平均）；优化摩尔比，平衡示踪灵敏度与功能稳定性。

✦ 2. 全光谱荧光与酶库覆盖

覆盖全波段荧光基团（FITC/Cy系列 / ICG等），适配多场景需求；30+类酶库，支持常规/稀有/重组酶定制，实现任意荧光-酶组合。

✦ 3. 定制与规模化兼具

100μg-10mg多规格交付，适配研发与量产；支持个性化参数调整，按需优化产物性能。

✦ 6. 技术支持与方案共创

全流程专业咨询，含选型、方案设计与数据解读；可定制复杂需求方案如双荧光标记、酶抑制剂联用），助力研究高效推进。