单抗及Fab段表达
单抗及Fab段表达
★服务概述
抗体及其片段是纳米载体主动靶向的经典识别元件。本服务提供单克隆抗体（mAb）与 Fab/Fab′/scFv/纳米抗体（VHH）等片段的表达制备、纯化表征，以及抗体片段与脂质体/纳米粒的定向偶联（免疫脂质体）服务（限科研用途）。
★技术原理
Fab′ 片段经温和还原可暴露铰链区游离巯基（-SH），与脂质体表面的马来酰亚胺基团发生特异性迈克尔加成，形成稳定硫醚键，实现抗体的定向偶联。相较整抗偶联，Fab′ 分子更小、清除更快、非特异摄取更低，且更易穿透实体瘤。抗体可变区（scFv/VHH）则可通过基因工程表达并与脂质/聚合物偶联。
★技术要点
- ◆表达体系选择：哺乳动物细胞（HEK293/CHO）用于糖基化全长抗体，大肠杆菌用于 Fab/scFv。
- ◆纯化策略：Protein A/G 亲和、离子交换与分子排阻，确保单体纯度。
- ◆片段化与还原：酶切（木瓜蛋白酶/胃蛋白酶）或还原控制巯基数量，避免过度还原导致失活。
- ◆定向偶联：利用 Fab′ 铰链巯基与马来酰亚胺定点偶联，控制偶联比。
- ◆活性保持：偶联后需验证抗原结合活性（ELISA/流式）。
★服务内容与流程
- 1.抗原/序列信息确认与表达体系设计
- 2.表达与纯化（mAb / Fab / scFv / VHH）
- 3.纯度与理化表征（SDS-PAGE、SEC-HPLC）
- 4.片段化与还原（Fab′）
- 5.免疫脂质体偶联（马来酰亚胺—巯基）
- 6.偶联比与活性验证（ELISA、流式）
- 7.靶向结合与细胞摄取评价（可按需）
★表征与测试指标
| 项目 | 典型指标 | 方法 |
|---|---|---|
| 纯度 | SDS-PAGE 单一条带；SEC 单体 ≥ 95% | SDS-PAGE、SEC-HPLC |
| 浓度 | A280 定量 | UV-Vis |
| 活性 | 抗原结合活性 | ELISA、流式 |
| 偶联比 | 每载体抗体分子数可调 | BCA、荧光定量 |
| 靶向性 | 靶细胞 vs 对照细胞结合 | 流式、共聚焦 |
★应用示例
- ◆抗 HER2 免疫脂质体：Fab′ 偶联实现乳腺癌靶向递送。
- ◆抗 CD19/CD20 纳米载体：B 细胞肿瘤靶向。
- ◆纳米抗体偶联：VHH 用于高穿透性实体瘤靶向。
★送样与交付
请提供抗原信息或抗体序列；交付物包括纯化抗体/片段、纯度与活性报告、偶联验证数据及实验报告。
★相关产品
可配套 DSPE-PEG-马来酰亚胺等偶联脂质材料，详见产品目录。
上海舜纳生物科技公司纳米医学研发中心 Sunlipo Biotech Research Center for Nanomedicine
邮箱：sunlipotech@163.com（技术服务）info@med-nanotech.com（应用开发）
电话：86-21-5127 9909 传真：86-21-5193 6393
