荧光标记 siRNA：递送效率“看得见”的对照

做 siRNA 递送实验时，"到底有多少真正进了细胞"常常是结论的分水岭。荧光标记的 scramble siRNA 把看不见的入胞过程变成看得见的信号：舜纳纳米现货供应 Cy5 标记 siRNA（阴性对照）与 FAM 标记 siRNA（阴性对照）两款示踪用双链，批次质控一致，可与转染试剂直接混用，也可送 LNP 包封后做封装与入胞联动分析。本文梳理对照设计、光谱选择、三大应用场景与定量注意事项。

◆ 一、scramble 对照的设计原则

示踪用阴性对照的核心，是除序列随机化外与实验组 siRNA 保持一切可比较的一致性：

◆ 链长与实验 siRNA 一致（常见 21 nt、3' 端 2 nt dT 突出）；

◆ GC 含量与碱基组成尽量贴近实验链，仅打乱序列顺序；

◆ 经数据库比对，避免与靶基因组存在连续同源片段，不产生已知脱靶沉默；

◆ 化学修饰模式与实验链对齐，让"序列特异性"成为唯一变量；

◆ 染料通常标记在正义链（passenger 链）5' 端，尽量不干扰引导链装载与对照性质。

这样一款对照既用于流式、成像的定量基线，也用于排除转染试剂本身的细胞摄取背景。

◆ 二、Cy5 与 FAM 的光谱参数怎么选

两款标记 siRNA 的荧光团参数差异，直接决定通道与场景适配：

◆ FAM：激发/发射约 494/518 nm，与 FITC 通道共用，488 nm 激光器即可采集，量子产率高，适合与 GFP 之外通道的多色面板搭配；

◆ Cy5：激发/发射约 650/670 nm，用 633–640 nm 激光器或活体成像近红外通道采集，组织穿透更深、自发荧光背景更低；

◆ 选择建议：细胞多色流式且有 GFP 通道冲突时优先 Cy5；以活体分布为主时务必选 Cy5 标记 siRNA（阴性对照）；只做体外共定位且设备为蓝光激发时，FAM 标记 siRNA（阴性对照）灵敏度更友好。

【舜纳纳米SunLipoNanoTech】图1 Cy5 与 FAM 光谱窗口及流式/活体成像通道选择示意（配图待插入）

◆ 三、三大典型应用场景

1. 流式细胞术：标记 siRNA 与转染试剂按比例混合后直接上机，阳性率与中位荧光强度（MFI）横向比较不同配比、不同孵育时间的入胞差异，一张图说清配方优劣；

2. 活体成像：Cy5 标记链尾静脉或局部给药后，监测肝脏、脾脏及给药部位的荧光滞留，近红外通道信噪比高，适合长时间跟踪；

3. 共聚焦共定位：与溶酶体/内体标记染料共染，观察信号是否从点状囊泡弥散到胞质，用共定位系数辅助判断内体逃逸程度。

【纳米医学网Med-NanoTech.com】图2 流式—活体成像—共聚焦三场景递送示踪工作流（配图待插入）

◆ 四、与转染试剂及 LNP 包封的联动

体外快速建立基线：取 阳离子脂质体转染试剂按说明书梯度混合标记 siRNA，转染目的细胞后上流式，即可得到"自由入胞"参考上限。若课题评估的是包封型递送，可将标记 siRNA 一并送 LNP 递送系统技术服务完成包封，同批拿到粒径、包封率数据，再用同一荧光骨架比较脂质体复合物与 LNP 的胞内信号——同一支染料，横向可比，避免体系间漂移。

◆ 五、定量时的三个注意事项

◆ 组织自发荧光：肝、肾及巨噬细胞富集组织背景强，活体与切片定量必须设未给药组织空白，并优先使用 Cy5 远红通道压低背景；

◆ pH 猝灭：FAM 在早期内体/溶酶体的酸性环境中信号明显减弱，此时荧光强度低于真实携带量，解读"逃逸前后"信号需格外谨慎；Cy5 受 pH 影响相对较小；

◆ 标记比：标记率过高会影响双链稳定性与对照性质，过低则成像不灵敏；定量比较请固定使用同一批次标记品，先在成像/流式设备线性区间内做信号标准曲线，再上生物样本。

◆ 六、用途说明

以上标记 siRNA 及配套的转染、LNP 包封均为科研用途，不提供临床/人体用途。给药途径、剂量与动物操作请遵循所在单位实验动物与生物安全管理规定。

◆ 咨询方式

如需 Cy5 标记 siRNA（阴性对照）、FAM 标记 siRNA（阴性对照）现货规格，或配套阳离子脂质体转染试剂与 LNP 包封方案，请通过上海舜纳站内留言页面，注明实验 siRNA 的序列特征、目标场景（流式/活体/共定位）与期望标记链，我们会回应对应现货批次与技术建议。